Bộ phim với ngôi sao Maria Bello thủ vai nữ thám tử Jane Timoney – cô gái đã luôn đấu tranh để được chấp nhận trong biệt đội cảnh sát toàn nam tại New York. Mặc dù là một người kỷ luật, thông minh và sắc xảo, cô vẫn phải giáp mặt với không ít những chống đối khi chuyển đến đội đặc nhiệm ở Manhattan. Tuy được sự giúp đỡ tận tình của Sếp là Đại uý Sweeney, nhưng Jane  cần nỗ lực nhiều hơn để có được sự kính trọng của những đồng nghiệp còn lại.

“Nghi phạm số một” mô tả cuộc sống của Timoney với quyết định chứng minh năng lực bản thân khi phải đương đầu với không ít những tội ác trong thành phố, vượt qua các định kiến trong chính đội của mình, đồng thời cân bằng mối quan hệ với người cha là cựu cảnh sát và bạn trai. Tài năng thiên bẩm và thái độ kiên cường của Timoney đã khiến cô thành một ngôi sao mới nổi trong công việc nhưng liệu điều này có khiến cô phải hi sinh quá nhiều thứ?